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DNA琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤(待改)

仪龙生物 时间:2017-11-06

 

 

     中国教育装备采购网2016-09-14 15:22

 

一、实验目的

学习和掌握琼脂糖电泳法鉴定DNA的原理和方法。
二、实验原理
琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖,具亲水性,但不带电荷,是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下(pH8.0的缓冲液)带负电荷,在电场中通过凝胶介质向正极移动,不同DNA分子片段由于分子和构型不同,在电场中的泳动速率液不同。溴化乙锭(EB)可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物,经紫外线照射后,可分出不同的区带,达到分离、鉴定分子量,筛选重组子的目的。上海创赛科技提供1239-45-8,溴化乙锭(EB),BR 进分99%,商品编号:D16-1013683-1g,价格518元。
三、实验材料
实验14提取 的DNA样品,
四、器具及药品
电泳仪,电泳槽,紫外透射反射仪,恒温水浴锅,微波炉,微量进样器,三羟甲基氨基甲烷,盐酸,醋酸钠,EDTA,琼脂糖,溴酚蓝,溴化乙锭。上海创赛科技提供77-86-1,三羟甲基氨基甲烷,Tris>99%,分子生物学级 ,商品编号:C84-3739-100g,价格65元。
五、实验步骤
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净,晾干,用胶带将两端的开口封好,放在水平的工作台上,插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中,(按0.3-1.5%的琼脂糖含量,1-25kb大小的DNA用1%的凝胶,20-100kb的DNA用0.5%的凝胶,200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶)置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化(不要加热至沸腾),取出摇匀。上海创赛科技提供9012-36-6,琼脂糖 ITM,Agarose ITM,Gel Strength(1.5% gel)>1,200 g/cm2 ,商品编号:C84-2678-5G,价格93元。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后,在电泳槽内加入电泳缓冲液,然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品与加样缓冲液按4:1混匀后,用微量移液器将混合液加到样品槽中,每槽加10-20μl,记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线,点样孔一端接负极,另一端接正极,打开电源,调电压至3-5V/cm,电泳1-3hr,当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时,停止电泳。上海创赛科技提供JY-JX5快速SSR电泳槽,电泳仪,商品编号:C71-JY-JX5-台,价格1176元。
7、染色和观察
取出凝胶,放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min,即可在254nm的紫外灯下观察,有橙红色荧光条带的位置,即为DNA条带,或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂,操作时要小心,必须戴手套。上海创赛科技提供UV-Ⅱ手提紫外灯,紫外分析仪 ,商品编号:C71-UV-Ⅱ-台,价格1050元。
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来源:中国教育装备采购网 作者:上海创赛科技有限公司 责任编辑:黄磊

 

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